Prevalence and association of mycoplasma infection in the development of coronary artery disease / Prevalência e associação de infecção por micoplasma no desenvolvimento de doença arterial coronariana

Abstract Coronary heart disease (CHD) has been associated with significant morbidity and mortality worldwide. Although remain controversial, several studies have demonstrated the association of M. pneumoniae infections with atherosclerosis. We evaluated the possible association of mycoplasma infections in patients diagnosed with atherosclerosis by ELISA and PCR methods. Atherosclerotic tissue samples and blood samples were collected for the detection of mycoplasma antibodies (IgA) by ELISA from the 97 patients with coronary artery disease (CAD). M. pneumoniae specific IgA, IgG and IgM were measured by using the Anti-M. pneumoniae IgA/IgG/IgM ELISA. Detection of M. pneumoniae targeting the P1 adhesion gene was performed by PCR Acute infection of M. pneumoniae was diagnosed in 43.3% (42) of patients by PCR. The M. pneumoniae specific antibodies were detected in 36.1% (35) of patients. Twenty-five (25.8%) cases had IgG antibodies, 15 (15.5%) cases had IgM antibodies, 3 (3.1%) cases had IgA antibodies, 10 (10.3%) cases had both IgM + IgG antibodies and 1 (1%) case of each had IgM + IgA and IgG + IgA antibodies. None of the cases was positive for all three antibodies. A Pearson correlation coefficient analysis revealed an excellent correlation between the PCR and the serological results (r=0.921, p<0.001). A majority (17, 40.5%) of the M. pneumoniae positive patients are within the 41-50 years of age group, followed by 10 (23.8%) patients in the age group of 61-70 years and 2 (4.8%) patients were >70 years of age. Our study reported an unusually higher prevalence of M. pneumoniae by serological tests (36.1%) and PCR (43.3%). Although the hypothesis of the association of M. pneumoniae and CAD is yet to be proven, the unusually high prevalence of M. pneumoniae in CAD patients indicates an association, if not, in the development of atherosclerosis.

Resumo A doença coronariana (DCC) tem sido associada a significativa morbidade e mortalidade em todo o mundo. Embora ainda sejam controversos, vários estudos têm demonstrado a associação de infecções por M. pneumoniae com aterosclerose. Avaliamos a possível associação de infecções por micoplasma em pacientes com diagnóstico de aterosclerose pelos métodos ELISA e PCR. Amostras de tecido aterosclerótico e amostras de sangue foram coletadas para a detecção de anticorpos contra micoplasma (IgA) por ELISA de 97 pacientes com doença arterial coronariana (DAC). IgA, IgG e IgM específicos para M. pneumoniae foram medidos usando o Anti-M. pneumoniae IgA / IgG / IgM ELISA. A detecção de M. pneumoniae visando o gene de adesão P1 foi realizada por PCR. A infecção aguda por M. pneumoniae foi diagnosticada em 43,3% (42) dos pacientes pela PCR. Os anticorpos específicos para M. pneumoniae foram detectados em 36,1% (35) dos pacientes. Vinte e cinco (25,8%) casos tinham anticorpos IgG, 15 (15,5%) casos tinham anticorpos IgM, 3 (3,1%) casos tinham anticorpos IgA, 10 (10,3%) casos tinham anticorpos IgM + IgG e 1 (1%) caso de cada um tinha anticorpos IgM + IgA e IgG + IgA. Nenhum dos casos foi positivo para os três anticorpos. A análise do coeficiente de correlação de Pearson revelou uma excelente correlação entre o PCR e os resultados sorológicos (r = 0,921, p < 0,001). A maioria (17, 40,5%) dos pacientes positivos para M. pneumoniae está na faixa etária de 41-50 anos, seguida por 10 (23,8%) pacientes na faixa etária de 61-70 anos e 2 (4,8%) pacientes tinham > 70 anos de idade. Nosso estudo relatou uma prevalência incomumente maior de M. pneumoniae por testes sorológicos (36,1%) e PCR (43,3%). Embora a hipótese da associação de M. pneumoniae e DAC ainda não tenha sido comprovada, a prevalência incomumente alta de M. pneumoniae em pacientes com DAC indica uma associação, se não, no desenvolvimento de aterosclerose.

Prevalence and association of mycoplasma infection in the development of coronary artery disease / Prevalência e associação de infecção por micoplasma no desenvolvimento de doença arterial coronariana

Coronary heart disease (CHD) has been associated with significant morbidity and mortality worldwide. Although remain controversial, several studies have demonstrated the association of M. pneumoniae infections with atherosclerosis. We evaluated the possible association of mycoplasma infections in patients diagnosed with atherosclerosis by ELISA and PCR methods. Atherosclerotic tissue samples and blood samples were collected for the detection of mycoplasma antibodies (IgA) by ELISA from the 97 patients with coronary artery disease (CAD). M. pneumoniae specific IgA, IgG and IgM were measured by using the Anti-M. pneumoniae IgA/IgG/IgM ELISA. Detection of M. pneumoniae targeting the P1 adhesion gene was performed by PCR Acute infection of M. pneumoniae was diagnosed in 43.3% (42) of patients by PCR. The M. pneumoniae specific antibodies were detected in 36.1% (35) of patients. Twenty-five (25.8%) cases had IgG antibodies, 15 (15.5%) cases had IgM antibodies, 3 (3.1%) cases had IgA antibodies, 10 (10.3%) cases had both IgM + IgG antibodies and 1 (1%) case of each had IgM + IgA and IgG + IgA antibodies. None of the cases was positive for all three antibodies. A Pearson correlation coefficient analysis revealed an excellent correlation between the PCR and the serological results (r=0.921, p70 years of age. Our study reported an unusually higher prevalence of M. pneumoniae by serological tests (36.1%) and PCR (43.3%). Although the hypothesis of the association of M. pneumoniae and CAD is yet to be proven, the unusually high prevalence of M. pneumoniae in CAD patients indicates an association, if not, in the development of atherosclerosis.

A doença coronariana (DCC) tem sido associada a significativa morbidade e mortalidade em todo o mundo. Embora ainda sejam controversos, vários estudos têm demonstrado a associação de infecções por M. pneumoniae com aterosclerose. Avaliamos a possível associação de infecções por micoplasma em pacientes com diagnóstico de aterosclerose pelos métodos ELISA e PCR. Amostras de tecido aterosclerótico e amostras de sangue foram coletadas para a detecção de anticorpos contra micoplasma (IgA) por ELISA de 97 pacientes com doença arterial coronariana (DAC). IgA, IgG e IgM específicos para M. pneumoniae foram medidos usando o Anti-M. pneumoniae IgA / IgG / IgM ELISA. A detecção de M. pneumoniae visando o gene de adesão P1 foi realizada por PCR. A infecção aguda por M. pneumoniae foi diagnosticada em 43,3% (42) dos pacientes pela PCR. Os anticorpos específicos para M. pneumoniae foram detectados em 36,1% (35) dos pacientes. Vinte e cinco (25,8%) casos tinham anticorpos IgG, 15 (15,5%) casos tinham anticorpos IgM, 3 (3,1%) casos tinham anticorpos IgA, 10 (10,3%) casos tinham anticorpos IgM + IgG e 1 (1%) caso de cada um tinha anticorpos IgM + IgA e IgG + IgA. Nenhum dos casos foi positivo para os três anticorpos. A análise do coeficiente de correlação de Pearson revelou uma excelente correlação entre o PCR e os resultados sorológicos (r = 0,921, p 70 anos de idade. Nosso estudo relatou uma prevalência incomumente maior de M. pneumoniae por testes sorológicos (36,1%) e PCR (43,3%). Embora a hipótese da associação de M. pneumoniae e DAC ainda não tenha sido comprovada, a prevalência incomumente alta de M. pneumoniae em pacientes com DAC indica uma associação, se não, no desenvolvimento de aterosclerose.

Prevalence and association of mycoplasma infection in the development of coronary artery disease

Abstract Coronary heart disease (CHD) has been associated with significant morbidity and mortality worldwide. Although remain controversial, several studies have demonstrated the association of M. pneumoniae infections with atherosclerosis. We evaluated the possible association of mycoplasma infections in patients diagnosed with atherosclerosis by ELISA and PCR methods. Atherosclerotic tissue samples and blood samples were collected for the detection of mycoplasma antibodies (IgA) by ELISA from the 97 patients with coronary artery disease (CAD). M. pneumoniae specific IgA, IgG and IgM were measured by using the Anti-M. pneumoniae IgA/IgG/IgM ELISA. Detection of M. pneumoniae targeting the P1 adhesion gene was performed by PCR Acute infection of M. pneumoniae was diagnosed in 43.3% (42) of patients by PCR. The M. pneumoniae specific antibodies were detected in 36.1% (35) of patients. Twenty-five (25.8%) cases had IgG antibodies, 15 (15.5%) cases had IgM antibodies, 3 (3.1%) cases had IgA antibodies, 10 (10.3%) cases had both IgM + IgG antibodies and 1 (1%) case of each had IgM + IgA and IgG + IgA antibodies. None of the cases was positive for all three antibodies. A Pearson correlation coefficient analysis revealed an excellent correlation between the PCR and the serological results (r=0.921, p 0.001). A majority (17, 40.5%) of the M. pneumoniae positive patients are within the 41-50 years of age group, followed by 10 (23.8%) patients in the age group of 61-70 years and 2 (4.8%) patients were >70 years of age. Our study reported an unusually higher prevalence of M. pneumoniae by serological tests (36.1%) and PCR (43.3%). Although the hypothesis of the association of M. pneumoniae and CAD is yet to be proven, the unusually high prevalence of M. pneumoniae in CAD patients indicates an association, if not, in the development of atherosclerosis.

Resumo A doença coronariana (DCC) tem sido associada a significativa morbidade e mortalidade em todo o mundo. Embora ainda sejam controversos, vários estudos têm demonstrado a associação de infecções por M. pneumoniae com aterosclerose. Avaliamos a possível associação de infecções por micoplasma em pacientes com diagnóstico de aterosclerose pelos métodos ELISA e PCR. Amostras de tecido aterosclerótico e amostras de sangue foram coletadas para a detecção de anticorpos contra micoplasma (IgA) por ELISA de 97 pacientes com doença arterial coronariana (DAC). IgA, IgG e IgM específicos para M. pneumoniae foram medidos usando o Anti-M. pneumoniae IgA / IgG / IgM ELISA. A detecção de M. pneumoniae visando o gene de adesão P1 foi realizada por PCR. A infecção aguda por M. pneumoniae foi diagnosticada em 43,3% (42) dos pacientes pela PCR. Os anticorpos específicos para M. pneumoniae foram detectados em 36,1% (35) dos pacientes. Vinte e cinco (25,8%) casos tinham anticorpos IgG, 15 (15,5%) casos tinham anticorpos IgM, 3 (3,1%) casos tinham anticorpos IgA, 10 (10,3%) casos tinham anticorpos IgM + IgG e 1 (1%) caso de cada um tinha anticorpos IgM + IgA e IgG + IgA. Nenhum dos casos foi positivo para os três anticorpos. A análise do coeficiente de correlação de Pearson revelou uma excelente correlação entre o PCR e os resultados sorológicos (r = 0,921, p 0,001). A maioria (17, 40,5%) dos pacientes positivos para M. pneumoniae está na faixa etária de 41-50 anos, seguida por 10 (23,8%) pacientes na faixa etária de 61-70 anos e 2 (4,8%) pacientes tinham > 70 anos de idade. Nosso estudo relatou uma prevalência incomumente maior de M. pneumoniae por testes sorológicos (36,1%) e PCR (43,3%). Embora a hipótese da associação de M. pneumoniae e DAC ainda não tenha sido comprovada, a prevalência incomumente alta de M. pneumoniae em pacientes com DAC indica uma associação, se não, no desenvolvimento de aterosclerose.

Diagnosis and treatment of HEp-2 cells contaminated with mycoplasma / Diagnóstico e tratamento de células HEp-2 contaminadas por micoplasma

Abstract Contamination of primary and cell cultures by mycoplasmas is one of the main economic and biological pitfalls in basic research, diagnosis and manufacture of biotechnological products. It is a common issue which may be difficult to conduct surveillance on. Mycoplasma presence may affect several physiological parameters of the cell, besides being considered an important source of inaccurate and/or non-reproducible scientific results. Each cell type presents characteristical symptoms, mainly morphological, that indicate a contamination by mycoplasma. HEp-2 cells originate from carcinoma of the larynx and are, therefore, part of the respiratory tract, which is one of mycoplasma habitats. Despite the importance these cells in several biological research (evaluation of cell proliferation and migration, apoptosis, antiviral and antitumor compounds), the alterations induced by mycoplasma contamination in HEp-2 cells have not yet been described. Here, we describe the progressive morphological alterations in culture of HEp-2 cells infected with mycoplasma, as well as the-diagnosis of the infection and its treatment. Mycoplasma contamination described within this work led to cytoplasm elongation, cell-to-cell spacing, thin plasma membrane projections, cytoplasmic vacuoles, fusion with neighboring cells, and, finally, cell death. Contamination was detected by fluorescence imaging (DAPI) and PCR reactions. The cultures were treated with BM-Cyclin antibiotic to eliminate contamination. The data presented here will be of relevance to researchers whose investigations involve cell culture, especially respiratory and HEp-2 cells.

Resumo A contaminação de culturas primárias e celulares por micoplasmas é uma das principais armadilhas econômicas e biológicas da pesquisa básica, diagnóstico e fabricação de produtos biotecnológicos. Trata-se de uma contaminação rotineira, mas de difícil acompanhamento. A presença de micoplasma pode afetar vários parâmetros fisiológicos da célula, além de ser considerada uma importante fonte de resultados científicos imprecisos e/ou não reprodutíveis. Cada tipo de célula apresenta sintomas característicos, principalmente morfológicos, que indicam uma contaminação por micoplasma. As células HEp-2 são originárias do carcinoma da laringe e, portanto, fazem parte do trato respiratório, um dos habitats do micoplasma. Apesar da importância destas células em diversas pesquisas biológicas (avaliação da proliferação e migração celular, apoptose, compostos antivirais e antitumorais), as alterações decorrentes da contaminação por micoplasma nestas células ainda não foi descrita. Aqui, descrevemos as alterações morfológicas progressivas na cultura de células HEp-2 infectadas por micoplasma, bem como o diagnóstico da infecção e seu tratamento. A contaminação por micoplasma descrita neste trabalho resultou em alongamento citoplasmático, espaçamento entre células, projeções delgadas da membrana plasmática, vacúolos citoplasmáticos, fusão de células vizinhas e, finalmente, morte celular. A contaminação foi detectada por imagens de fluorescência (DAPI) e reações de PCR. As culturas foram tratadas com antibiótico BM-Cyclin para eliminar a contaminação. Os dados aqui apresentados serão de relevância para pesquisadores cujas investigações envolvem cultura celular, principalmente células respiratórias e HEp-2.

'Candidatus Mycoplasma haemoalbiventris' and tick-borne pathogens screening in white-eared opossums (Didelphis albiventris) from Curitiba and Foz do Iguaçu Cities, Paraná State, southern Brazil / 'Candidatus Mycoplasma haemoalbiventris' e triagem para patógenos transmitidos por carrapatos em gambás de orelha branca (Didelphis albiventris) das cidades de Curitiba e Foz do Iguaçu, Estado do Paraná, sul do Brasil

Abstract Hemoplasmas are epierythrocytic bacteria that infect mammals. 'Candidatus Mycoplasma haemoalbiventris' was detected in white-eared opossums (Didelphis albiventris) from southern and central-western Brazil. The present study aimed at: i) screening opossums for tick-borne (TBP) pathogens (Piroplasmida and Anaplasmataceae) and ii) detecting and characterizing hemoplasma species infecting opossums from Curitiba and Foz do Iguaçu cities in the Paraná State, southern Brazil. Thirty blood samples from white-eared opossums were evaluated by PCR assays. Animals were not infested by ectoparasites. The mammalian endogenous gapdh gene was consistently amplified in all samples. All opossums tested negative for Theileria/Babesia spp. and Ehrlichia/Anaplasma spp. by PCR based on 18S rRNA and 16S rRNA genes, respectively. A genus-specific PCR assay based on the 16S rRNA gene of hemoplasmas showed that three/13 (23.08%; CI 95%: 8.18-50.26%) opossums from Foz do Iguaçu were positive for hemotropic Mycoplasma sp. All opossums from Curitiba tested negative for hemoplasmas. Sequencing of both the 16S and 23S rRNA genes revealed that the animals were infected by 'Ca. M. haemoalbiventris'. Although 'Ca. M. haemoalbiventris' is prevalent in opossums in Brazil, clinical signs associated with its infection and its putative vectors remain unknown.

Resumo Hemoplasmas são bactérias epieritrocíticas que infectam mamíferos. 'Candidatus Mycoplasma haemoalbiventris' foi detectado previamente em gambás-de-orelha-branca (Didelphis albiventris) das regiões sul e centro-oeste do Brasil. O presente estudo objetivou: i) triar os gambás para as doenças transmitidas por carrapatos (Piroplasmida e Anaplasmataceae); e ii) detectar e caracterizar as espécies de hemoplasma que infectam gambás nas cidades de Curitiba e Foz do Iguaçu, no Estado do Paraná, sul do Brasil. Trinta amostras de sangue de gambás-de-orelha-branca foram analisadas por PCR. Os animais não estavam infestados por ectoparasitos. O gene endógeno de mamífero gapdh foi amplificado em todas as amostras. Todos os gambás testaram negativos para Theileria/Babesia spp. e Ehrlichia/Anaplasma spp. por PCR, respectivamente, para os genes 18S rRNA e 16S rRNA. Uma PCR gene-específica, baseada no gene 16S rRNA de hemoplasmas, mostrou que três/13 (23,08%; CI 95%: 8,18-50,26%) gambás de Foz do Iguaçu foram positivos para Mycoplasma sp. hemotrópico. Todos os gambás de Curitiba testaram negativos para hemoplasmas. O sequenciamento de fragmentos dos genes 16S e 23S rRNA revelou que os animais estavam infectados pelo 'Ca. M. haemoalbiventris'. Embora 'Ca. M. haemoalbiventris' seja prevalente em gambás no Brasil, os sinais clínicos associados à infecção e os prováveis vetores permanecem desconhecidos.

Neumonía y miositis aguda benigna de la infancia por Mycoplasma pneumoniae asociado a encefalitis: reporte de caso / Pneumonia and benign acute myositis of childhood due to Mycoplasma pneu-moniae associated with encephalitis: a case report

Una de las principales causas de neumonía en niños entre 5 y 15 años es el Mycoplasma pneumoniae, una bacteria que causa manifestaciones clínicas atípicas como la miositis y encefalitis. Reportamos un caso de una niña de cinco años que presentó limitación funcional en extremidades inferiores precedida por una infección respiratoria superior. Posteriormente, se complicó con neumonía y encefalitis. Se administraron antibióticos y antivirales debido al deterioro clínico del paciente. La serología de inmunoglobulinas para Mycoplasma pneumoniae fue positiva; mientras que los demás estudios virales fueron negativos. El curso clínico fue favorable con disminución progresiva de la dificultad respiratoria, trastorno del sensorio y mejoría en la limitación funcional en las extremidades inferiores a los 15 días de tratamiento.

One of the leading causes of pneumonia in children between 5 to 15 years is Mycoplasma pneumoniae, a bacterium that causes atypical clinical manifestations such as myositis and encephalitis. We report a 5-year-old girl who presented functional limitations of the lower extremities preceded by an upper respiratory infection. Later on, she developed pneumonia and encephalitis. Antibiotics and antivirals were administered due to the clinical deterioration of the patient. IgM serology for Mycoplasma pneumoniae was positive, while the other viral studies were negative. The clinical course was favorable with a progressive decrease in respiratory distress, sensorial disorder, and improvement in the functional limitations of the lower limbs after 15 days of treatment.

Diagnosis and treatment of HEp-2 cells contaminated with mycoplasma

Abstract Contamination of primary and cell cultures by mycoplasmas is one of the main economic and biological pitfalls in basic research, diagnosis and manufacture of biotechnological products. It is a common issue which may be difficult to conduct surveillance on. Mycoplasma presence may affect several physiological parameters of the cell, besides being considered an important source of inaccurate and/or non-reproducible scientific results. Each cell type presents characteristical symptoms, mainly morphological, that indicate a contamination by mycoplasma. HEp-2 cells originate from carcinoma of the larynx and are, therefore, part of the respiratory tract, which is one of mycoplasma habitats. Despite the importance these cells in several biological research (evaluation of cell proliferation and migration, apoptosis, antiviral and antitumor compounds), the alterations induced by mycoplasma contamination in HEp-2 cells have not yet been described. Here, we describe the progressive morphological alterations in culture of HEp-2 cells infected with mycoplasma, as well as the-diagnosis of the infection and its treatment. Mycoplasma contamination described within this work led to cytoplasm elongation, cell-to-cell spacing, thin plasma membrane projections, cytoplasmic vacuoles, fusion with neighboring cells, and, finally, cell death. Contamination was detected by fluorescence imaging (DAPI) and PCR reactions. The cultures were treated with BM-Cyclin antibiotic to eliminate contamination. The data presented here will be of relevance to researchers whose investigations involve cell culture, especially respiratory and HEp-2 cells.

Resumo A contaminação de culturas primárias e celulares por micoplasmas é uma das principais armadilhas econômicas e biológicas da pesquisa básica, diagnóstico e fabricação de produtos biotecnológicos. Trata-se de uma contaminação rotineira, mas de difícil acompanhamento. A presença de micoplasma pode afetar vários parâmetros fisiológicos da célula, além de ser considerada uma importante fonte de resultados científicos imprecisos e/ou não reprodutíveis. Cada tipo de célula apresenta sintomas característicos, principalmente morfológicos, que indicam uma contaminação por micoplasma. As células HEp-2 são originárias do carcinoma da laringe e, portanto, fazem parte do trato respiratório, um dos habitats do micoplasma. Apesar da importância destas células em diversas pesquisas biológicas (avaliação da proliferação e migração celular, apoptose, compostos antivirais e antitumorais), as alterações decorrentes da contaminação por micoplasma nestas células ainda não foi descrita. Aqui, descrevemos as alterações morfológicas progressivas na cultura de células HEp-2 infectadas por micoplasma, bem como o diagnóstico da infecção e seu tratamento. A contaminação por micoplasma descrita neste trabalho resultou em alongamento citoplasmático, espaçamento entre células, projeções delgadas da membrana plasmática, vacúolos citoplasmáticos, fusão de células vizinhas e, finalmente, morte celular. A contaminação foi detectada por imagens de fluorescência (DAPI) e reações de PCR. As culturas foram tratadas com antibiótico BM-Cyclin para eliminar a contaminação. Os dados aqui apresentados serão de relevância para pesquisadores cujas investigações envolvem cultura celular, principalmente células respiratórias e HEp-2.

Implementación de un control interno en la detección molecular de las principales especies de micoplasmas contaminantes de cultivos celulares / Implementation of an internal control in molecular detection of the main mycoplasma species contaminating cell cultures

Objetivo: Construir e implementar un control interno para la detección molecular de micoplasmas en cultivos celulares. Materiales y métodos: Se alinearon secuencias del RNA ribosomal 16S de las principales especies de micoplasmas reportadas como contaminantes de cultivos, y diseñaron oligonucleótidos para la detección de las mismas. Para la construcción del control interno se amplificó una secuencia espadadora, además de las secuencias de hibridación de los oligonucleótidos usados para detección. La amplificación desde dicho control generó un fragmento con tamaño diferente al obtenido desde una muestra positiva. Posteriormente, para la evaluación del efecto del control interno sobre la amplificación de una muestra positiva se realizó la prueba sobre diluciones seriadas de la muestra, en presencia y ausencia del control interno. Finalmente, se ensayó el protocolo utilizando sobrenadantes de cultivo provenientes de diferentes laboratorios. Resultados: Se observó alta homogeneidad al comparar los géneros Mycoplasma y Acholeplasma; no obstante se realizó el diseño de oligonucleótidos degenerados para aumentar teóricamente la eficiencia en la detección de todas las especies. Se demostró que la aplicación del control interno no afecta la sensibilidad de detección de la prueba. Los resultados obtenidos con muestras problema resaltan la importancia del control interno al realizar la prueba desde sobrenadantes de cultivo. Conclusiones: El uso del control interno evita la obtención de resultados falsos negativos, generados por presencia de inhibidores en la muestra. La implementación de la prueba beneficiará los laboratorios en cuyas investigaciones utilicen cultivos celulares y permitirá ejercer un control de calidad, lo cual hará más confiables los resultados/productos obtenidos.

Objective: to construct and implement an internal control for molecular detection of mycoplasma in cell cultures. Materials and Methods: Sequences of 16S ribosomal RNA of the major species of mycoplasma reported as contaminants in cell cultures were aligned, and oligonucleotides for detection were designed. For the construction of the internal control, a spacer sequence as well as sequences for hybridization of the oligonucleotides used for detection, were amplified. Amplification from the internal control and positive samples generated fragments with different sizes. Subsequently, to evaluate the effect of the internal control on the amplification of a positive sample, the assay was performed on serial dilutions of the sample in the presence and absence of the internal control. Finally, the protocol was tested using culture supernatants from different laboratories. Results: High homogeneity was observed when Mycoplasma and Acholeplasma genera were compared; however, degenerated oligonucleotides were designed to increase the efficiency of detection in all the analyzed species. It was shown that implementation of the internal control does not affect the sensitivity of detection. The results obtained with cell cultures samples highlighted the importance of the internal control. Conclusions: The use of an internal control facilitates the detection of false negative results generated by the presence of inhibitors in the sample. Implementation of the test as a quality control will benefit laboratories using cell cultures, making the results and / or products obtained more reliable.

Estudio de Chlamydia trachomatis, Ureaplasma urealyticum y Mycoplasma hominis en pacientes infértiles y abortadoras habituales / Study on Chlamydia trachomatis, Ureaplasma urealyticum and Mycoplasma homonis in infertile patients and with usual abortions

Algunos microorganismos como Chlamydia trachomatis, Ureaplasma urealyticum y Mycoplasma hominis han sido relacionados con diferentes procesos patológicos en mujeres sexualmente activas. OBJETIVO: Para conocer la frecuencia de estos agentes se realizó un estudio descriptivo observacional en el Hospital Ginecoobstétrico Ramón González Coro, en el período de noviembre de 2008 a enero de 2009. MÉTODOS: Se estudiaron 166 muestras de exudados vaginales y endocervicales tomadas a pacientes que acudieron a las consulta de infertilidad y abortadoras habituales. Se aplicaron los test diagnósticos para Chlamydia y micoplasmas genitales. RESULTADOS: De las pacientes estudiadas, 113 fueron positivas (68 por ciento), el test de Chlamydia se aplicó y 75 resultaron positivas a este microorganismo (45,2 por ciento), mientras que 57 fueron positivas a micoplasmas genitales (34,3 por ciento), de ellas 50 a Ureaplasma urealyticum, 4 a Mycoplasma hominis y en 3 muestras se aislaron Ureaplasma urealyticum más Mycoplasma hominis. Se encontró asociación de estos agentes con otros microorganismos. El 50,9 por ciento de los casos positivos a Mycoplasma tuvieron una infección moderada (29/57). El test de Mycoplasma permitió conocer la susceptibilidad de estos agentes frente a diferentes antimicrobianos; se encontró para Ureaplasma urealyticum una resistencia de 24 por ciento para la ofloxacina; 22 por ciento para la tetraciclina y 20 por ciento para la claritromicina; por su parte Mycoplasma hominis mostró el 75 por ciento de resistencia a la eritromicina y 100 por ciento a claritromicina y azitromicina; en los tres casos que coincidieron Ureaplasma urealyticum y Mycoplasma hominis se observó una resistencia elevada a la azitromicina, eritromicina y claritromicina. Hubo una alta sensibilidad frente minociclina y clindamicina. CONCLUSIONES: El microorganismo más frecuente en este estudio resultó C. trachomatis, M. hominis reportó más resistencia a los antimicrobianos que U. ure...

Some microorganisms like the Chlamydia trachomatis, Ureaplasma urealyticum and Mycoplasma homonis have been related to different pathological processes in women sexually actives. OBJECTIVE: To know the frequency of these agents a observational and descriptive study was conducted in the "Ram¾n Gonzßlez Coro" Gynecology and Obstetrics Hospital from November, 2008 to January, 2009. METHODS: One hundred and sixty six samples of vaginal exudates from patients seen in infertility consulting rooms with regular abortions were studied. Diagnostic tests for Chlamydia and genital Mycoplasm tests were applied. RESULTS: From the study patients, 113 were positive (68 percent), Chlamydia test was applied and 75 were positive to this microorganism (45.2 percent), whereas 57 were positive to genital micoplasma (34.3 percent), from them 50 were positive to Uraplasma urealyticum, 4 to Mycoplasma homonis, and in three samples Ureaplasma urealyticum and Mycoplasma homonis were isolated. There was association of these agents with other microorganisms. The 50.9 percent of cases positive to Mycoplasma had a moderate infection (29/57). The Mycoplasma's test allowed to know the susceptibility of these agents to different antimicrobial agents, in the case of Ureaplasma urealyticum there was a resistance of 24 percent to Ofloxacin; 22 percent to Tetracycline, and the 20 percent to Clarithromycin; Mycoplasma hominis showed a 75 percent of resistance to erythromycin and the 100 percent to Claritromycin and to Azithromycin in the thre cases where they coindiced. Ureaplasma urealyticum and Mycoplasma hominis had a significant resistance to Azithromycin, Eritromycin and Claritromycin. There was a high level of sensitivity to minocycline and to clindamycin. CONCLUSIONS: The more frequent microorganism in present study was the C. trachomatis, and M. hominis had more resistance to antimicrobials agents than U.uralyticum, both are very sensitive to minocycline and ...

Interacción sinérgica entre Mycoplasma fermentans y la exposición a ceniza volcánica / Synergistic interaction between Mycoplasma fermentans and exposure to volcanic ash

Introducción: Mycoplasma fermentans presenta propiedades inmunorreguladoras y puede desencadenar infecciones crónicas con signos leves de la enfermedad. Por su parte, la materia partículada atmosférica es un componente diverso y complejo de la contaminación del aire y que se asocia a efectos adversos para la salud. Objetivo: Estudiar el daño producido por la inoculación de Mycoplasma fermentans y la exposición a ceniza volcánica. Materiales y métodos: Las muestras de ceniza se colectaron en zonas cercanas al volcán Popocatépetl. Diez hamsters se expusieron a la inhalación de ceniza volcánica, tros diez ejemplares fueron inoculados intratraquealmente con Mycoplasma fermentans y expuestos a inhalación de ceniza volcánica. Diez hamsters no fueron inoculados ni expuestos a la inhalación de ceniza, considerándose como grupo control. A partir del día 60 los ejemplares se sacrificaron, obteniéndose muestras de sangre para determinar el hematocrito, la cuenta diferencial y detección de anticuerpos. Se realizó estudio histopatológico al tejido pulmonar de los ejemplares. Resultados: El grupo de hamsters expuestos a la ceniza volcánica mostraron perdida en peso y decremento en el conteo de neutrófilos. No se detectaron anticuerpos contra Mycoplasma fermentans. El tejido pulmonar de los ejemplares expuestos a la ceniza mostró detritus celulares, reacción inflamatoria aguda e infiltrado linfocitario. Los hamsters previamente infectados y expuestos a la ceniza volcánica presentaronengrosamiento de la pared alveolar, infiltrado de células plasmáticas, neutrófilos y foco hemorrágico. Estos resultados indican que Mycoplasma fermentans puede interaccionar con estímulos ambientales, como es el caso de la ceniza volcánica, pontecializando efectos adversos en la salud.

Mycoplasma synoviae infection on Newcastle disease vaccination of chickens / Infecção por Mycoplasma synoviae na vacinação da doença de Newcastle em galinhas

Newcastle disease is characterized by respiratory manifestations in association with nervous and/or digestive symptoms. Its prevention is done by vaccination with live attenuated (lentogenic strains) and/or killed vaccines. The lentogenic strains can lead to strong post-vaccination reaction, principally due to the presence of other pathogenic agents. Among them, Mycoplasma synoviae is worldwide important, mainly in Brazil. The dissemination of this agent in poultry flocks has been achieved due to difficulties in diagnosis and disease reproduction, virulence variations among different M.synoviae strains, and attribution of typical M.synoviae disease manifestation to other disease agents. This experimental study in SPF chicks (Gallus gallus), previously infected by M.synoviae and thereafter vaccinated against Newcastle disease, was done with the objective of evaluating M.synoviae pathogenicity through assessment of post-vaccinal respiratory reactions and serologic responses to Newcastle disease virus vaccine in the absence of environmental factors. A total of 86 three days old chicks were used, being 57 infected by eye and nostril drop, with chicken activated M. synoviae strain WVU 1853. Seven days later, 21 mycoplasma infected birds plus 29 not mycoplasma infected ones were vaccinated against Newcastle disease. As results, the not infected and vaccinated birds yielded, significantly, higher and longer lasting serologic responses to Newcastle disease vaccine virus than those infected and vaccinated. Similarly, the infected and vaccinated birds yielded lower serologic reactions to M.synoviae than those only mycoplasma infected. No post-vaccinal respiratory reaction was observed in the vaccinated birds.

A doença de Newcastle é caracterizada por manifestações respiratórias associadas a sintomas nervosos e/ou digestivos. Sua prevenção é feita pela vacinação com vacinas vivas atenuadas (cepas lentogênicas) e/ou inativadas. As cepas lentogênicas podem determinar acentuada reação pós-vacinal, principalmente na presença de outros patógenos. Entre eles, o Mycoplasma synoviae tem importância mundial, principalmente no Brasil. A disseminação deste agente nos planteís avícolas tem sido facilitada, devido a dificuldades de reprodução e diagnóstico da doença em aves, variação de virulência entre as diferentes cepas de M.synoviae e atribuição a outros patógenos de manifestação típica da micoplasmose por M.synoviae. Este estudo experimental em aves (Gallus gallus) SPF, previamente infectadas por M.synoviae e depois vacinadas contra Newcastle, foi realizado com objetivo de avaliar a patogenicidade do M.synoviae pela obtenção dareação respiratória pós-vacinal e a resposta sorológica para o vírus vacinal da doença de Newcastle, na ausência de fatores ambientais. Um total de 86 aves, com três dias de idade foram utilizadas, sendo 57 infectadas via ocular e intranasal, com cepa MS WVU 1853, ativada em galinhas. Sete dias depois, 21 aves infectadas por micoplasma e 29 não infectadas foram vacinadas contra a doença de Newcastle. Como resultados, aves não infectadas e vacinadas produziram resposta sorológica para o vírus vacinal da doença de Newcastle, significativamente mais elevada e mais duradora que aquelas infectadas e vacinadas. Igualmente, aves infectadas e vacinadas produziram reações sorológicas para M.synoviae mais baixa, que aquelas apenas infectadas. Não foram observadas reações respiratórias pós-vacinal nas aves vacinadas.

Avaliação da taxa de isolamento de micoplasmas do trato urogenital por um método comercial em comparação com meios de cultura produzidos no próprio laboratório / Assessing the rate of isolation of mycoplasma treatment of urogenital by a business method in compared with media culture produced in itself laboratory

Este trabalho procurou avaliar a taxa de isolamento de Mycoplasma hominis e Ureaplasma urealiticum/U. parvum emamostras de conteúdo vaginal de 84 mulheres atendidas em um laboratório de analises clínica de Blumenau – SC, por dois meios de cultura de procedência diferentes. Os resultados demonstraram 50,0 % de positividade para Ureaplasma urealiticum/U. parvum e 20,24% de positividade para Micoplasma hominis por cultura em meio feito em nosso laboratório (P< 0,0001) e 16,67% de positividade para U. urealiticum e 8,33% de positividade para M. hominis por cultura em meio comercial (P< 0,0001). As amostras que foram cultivadas por meio próprio e obtiveram resultado positivo foram também analisadas por diluições seriadas para identificar a quantidadedestes microrganismos expresso em C.C.U. (color changing units). Os resultados demonstraram que 52,94% destas amostras apresentaram C.C.U. maior que 104 para M. hominis e 42,86% apresentaram C.C.U. maior que 103 para U. urealyticum, sendo estesos níveis considerados clinicamente significativos para que a presença destes microrganismos seja implicada na etiologia dos sintomas. No presente trabalho discutiu-se as possíveis causas desta diferença de positividade entre os dois métodos utilizados.

Infección por micoplasmas en pacientes VIH-SIDA con enfermedad respiratoria / Infection caused by mycoplasmas in VIH-SIDA patients with respiratory disease

Se realizó un estudio prospectivo en 60 pacientes VIH/SIDA con manifestaciones respiratorias, en el período comprendido entre los meses de marzo a julio de 1998, encontrándose que 23 (38,3 %) fueron positivos para micoplasmas y la forma clínica que predominó en estos pacientes fue la infección respiratoria superior; de ellos fueron dados de alta mejorados 56,6 % y fallecieron 34,7 %, el conteo de linfocitos CD4+ menor que 200 células/mm³ se presentó en 69,6 % y el infiltrado bronconeumónico fue el hallazgo radiológico más frecuente. La coinfección con otras bacterias estuvo presente en 15 de los casos, predominando Pseudomona aeruginosa. La especie de micoplasma con mayor frecuencia encontrada fue Mycoplasma fermentans, y los pacientes infectados con esta especie estaban severamente inmunodeprimidos, además de colonizados por otros microorganismos.

A prospective study was carried out in 60 HIV/AIDS patients with respiratory manifestations, from March to July, 1998. 23 (38.3 %) proved to be positive for micoplasmas and the clinical form clinic prevailing in these patients was the upper respiratory infection. 56.6 % of them improved and were discharged, whereas 34.7 % died. The CD4+ lymphocites count under 200 cel/ mm3 was observed in 69.6 % and the bronchopneumonic infiltrate was the most frequent radiological finding. The co-infection with other bacterias was present in 15 of the cases, with a prevalence of Pseudomona aeruginosa. The species of mycoplasma with old opposing frequency was Mycoplasma fermentans was the mycoplasma species with the highest frequency found. The patients infected with this species were severely immunodepressed, besides being colonized by other microorganisms.